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超快细菌裂解液(E.coli Lysis Buffer)

超快细菌裂解液(E.coli Lysis Buffer)

产品编号:
P5109
分类:
蛋白纯化
产品货号:
规格:
专用培养基:
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¥600.00
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产品介绍
本产品是一款高效、温和的大肠杆菌细菌裂解试剂。它创新性地融合了两种酶的作用,复合溶菌酶:可 1 分钟内快速水解大肠杆菌细菌细胞壁 的肽聚糖层,实现胞内蛋白的温和释放。全能核酸酶:能 1 分钟内迅速降解释放出的 DNA 和 RNA,显著降低裂解液粘度,提升样品澄清度,减少内毒素污染,防止核酸干扰后续纯化步骤。与超声或高压均质等物理破碎法相比,本产品操作更简便,且避免了剧烈条件可能导致的蛋白降 解或变性。

技术参数
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使用方法
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菌体收集:培养并诱导表达目的蛋白,通过离心或超滤收集菌体,弃上清,并称量菌体湿重。
菌体重悬:根据后续实验需求,选择合适的裂解缓冲液(如 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 7.5 或 PBS)重悬菌体。务必保证菌体重悬均匀,无块状物,重悬体积可参考:每 1 克菌体湿重加入约 9 ml裂解缓冲液
加入超快细菌裂解液:按重悬液体积的 1/9 加入本超快细菌裂解液(例如:9 mL 重悬液加入 1 ml 超快细菌裂解液)
裂解孵育:轻轻混匀后,在 4℃至 25℃下静置或置于摇床/旋转混匀仪上低速孵育,室温下 1-10 分钟即可。1 分钟可释放 80%以上的可溶蛋 白;如果目的蛋白是包涵体,可以选择更长裂菌时间,尽量充分消化细胞壁,以便获得纯度更高的包涵体。
澄清与收集:将裂解液在 4℃下进行离心(推荐离心力 ≥8,000g),以分离可溶部分(上清)和不可溶部分(沉淀,如包涵体)。如果是可溶 性蛋白,小心转移上清至新管中,即得可溶性蛋白提取物;如果是包涵体,收集沉淀样品,经过洗涤、变性溶解,沉淀可用于包涵 体蛋白的纯化。

注意事项
1. 若使用 PBS 重悬菌体,核酸酶活性可能受到轻微抑制,可适当延长裂解时间。
2. 本超快细菌裂解液不含 EDTA,因此不会螯合金属离子,适用于镍柱(Ni-NTA) 等基于金属亲和层析的蛋白纯化。
3. 本产品释放的胞壁二糖会竞争结合 MBP 标签,影响其纯化效果,因此不推荐用于 MBP 融合蛋白的纯化,其他常用标签如 His、GST、Fc、S、 CBD 等均可正常使用。
4. 低温(4℃)裂解有助于防止蛋白降解,适合对温度敏感的目的蛋白。室温(25℃) 酶活更高,裂解效率更快,适合稳定性好的蛋白。
5. 离心获得上清静置一段时间变浑浊,这个可能是细菌碎片随着时间聚集形成的沉淀物,后续经过再次离心去除即可,不影响蛋白性质及后续纯化。

常见问题与解决方案
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