产品介绍
新赛美的 GST（谷胱甘肽）琼脂糖纯化树脂是一种专用于纯化谷胱甘肽 S-转移酶（GST）标签蛋白的亲和层析介质。它以高度交联的 4%琼脂
糖为基质，通过 12 个原子的间隔臂共价偶联还原型谷胱甘肽（GSH）作为配基。基于 GST 标签与 GSH 之间的特异性亲和力，该树脂能从复杂的细胞裂解液中一步纯化出高纯度的 GST 融合蛋白。
技术参数
注意：GST 与谷胱甘肽的结合依赖于流速。流量越低，结合能力越强。在上样和洗脱步骤中，流速也是必须要注意的。
纯化流程
缓冲液准备
平衡/洗杂缓冲液：PBS (pH 7.4)。常用配方：140 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na₂HPO₄, 1.8 mM KH₂PO₄。
洗脱缓冲液：用平衡/洗杂缓冲液配制 15mM 还原型谷胱甘肽（现配现用），一般谷胱甘肽溶解后 pH 会偏酸，需重新调整到 pH7.4 或 pH8.0
（建议调整到 pH8.0，适当提高 pH 能提高洗脱效率）。
注意：所有缓冲液和水在使用前最好用 0.22 μm 或 0.45 μm 的滤膜过滤除菌。可在缓冲液中加入 1-10 mM DTT 以维持蛋白稳定性
纯化操作流程
树脂准备：使用前充分颠倒容器，使树脂完全重悬。根据样品量吸取所需体积的悬液到层析柱中，自然流干储存液。用 5-10 倍柱体积的结合缓冲液平衡层析柱。
样品上样：将经过滤和离心澄清的样品上清加入层析柱，控制流速让目标蛋白与树脂充分结合。为确保最佳结合，建议使用较慢的流速。
洗杂：用 10-20 倍柱体积的结合缓冲液洗涤，去除未结合的杂蛋白，直至流出液在 280nm 的吸光度达到基线。
洗脱：用 1-5 倍柱体积的洗脱缓冲液进行洗脱，收集流出液，即为纯化的目的蛋白。可分段收集以得到浓度更高、更纯的产物。
清洗与保存：依次使用 3 倍柱体积的平衡缓冲液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，最后用 5 倍柱体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积
的 20%乙醇中，置于 4℃保存，防止填料被细菌污染。
SDS-PAGE 检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用 SDS-PAGE 进行检测，判定其纯化效果
色谱柱填装指南
用去离子水冲洗层析柱底筛板，关闭柱底出口，在柱底留出 1-2 cm 的去离子水。
将树脂悬液连续倒入层析柱，用玻璃棒沿柱壁倒入以减少气泡。
打开柱底出口，启动泵进行装填。初始流速宜慢，然后逐渐增加至目标流速。
柱床稳定后，标上柱床高度。后续使用时，流速不应超过最大装柱流速的 75%
常见问题与解决方案
